Phim xoay quanh nhận vật chính là Sydney Bristow là 1 điệp viên, nội gián của cảnh sát, có nhiệm vụ giả dạng để đột nhập vào các tổ chức mafia trên thế giới. Mỗi tập phim là 1 nhiệm vụ khác nhau của cô và các đồng nghiệp, tuy nhiệm vụ khác nhau nhưng đều có điểm chung đó là rất nguy hiểm, luôn đe dọa tính mạng Sydney và đòi hỏi cô phải hết sức khéo léo, mưu trí để thoát chết và hoàn thành nhiệm vụ.

Khi anh trai bị kết án oan vì tội giết người, một kỹ sư kết cấu đã quyết tâm cứu anh mình ra khỏi Nhà tù Liên bang Fox River khét tiếng.